نام علمی آنزیم آلکالین فسفاتازEC3.1.3.1 Orthophosphor monoester phosphohydrolase می باشد. این آنزیم از نظر ساختمانی یک گلیکوپروتئین دی مری است که فقط در محیط قلیایی به کمک یون منیزیم به عنوان فعال کننده عمل می کند. این آنزیم در سطح وسیع، در طبیعت پراکنده است. آلکالین فسفات یک آنزیم متصل به غشا است. هدف از این تحقیق، خالص سازی این آنزیم طی هفت مرحله از جفت است که بعد از تهیه محلول هموژنیت بافت جفت، این بافت تحت عمل استخراج با بوتانل نرمال قرار گرفت و سپس بوسیله فیلتراسیون ژلی روی سفادکس 200G و عمل رسوب دادن محلول حاصل با آمونیم سولفات و با استن و در مرحله بعد توسط کروماتوگرافی روی ستون دی اتیل آمینواتیل سلولز (DEAE - CELLULOSE) با گرادیانت کلرور سدیم از ستون خارج گردید. در مرحله نهایی، الکتروفورز پره پارتیو (Preparative) انجام گرفت. فعالیت مخصوص آنزیم به دست آمده از جفت، U/mg 201.9 و فاکتور خالص سازی برای جفت، 611.8 به دست آمد که نشان دهنده جداسازی کامل این آنزیم بود. برای رنگ آمیزی آلکالین فسفاتاز به جای این که از N نفتیل فسفات استفاده شود، از پارانیتروفنیل فسفات استفاده شد که در محل آلکالین فسفاتاز در ژل الکتروفورز، یک باند به رنگ زرد طلایی ظاهر شد و خالص سازی این آنزیم را تایید نمود.

هدف: تولید آنتی بادی مونوکلونال علیه آنزیم آلکالین فسفاتاز به منظور استفاده در روشهای ایمونوهیستوشیمی و ایمونوسیتوشیمی مثل روش آلکالین فسفاتاز - آنتی آلکالین فسفاتاز.(APAAP) مواد و روشها: در این پژوهش ابتدا خموشهای Balb/c ماده تحت تزریقات منظم آنزیم آلکالین فسفاتاز قرار گرفتند و تیتر آنتی بادی تولید شده پس از هر تزریق مورد بررسی قرار گرفت. پس از اطمینان از ایمن شدن موشها بین لنفوسیتهای طحالی آنها و سلولهای میلومای Sp2/0 با کمک پلی اتیلن گلیکول PEG)، 50درصد) امتزاج برقرار شد و هیبریدوماهای تولید شده به کمک محیط انتخابی HAT جداسازی شدند. بر روی مایع رویی تمام کلونهای هیبریدومایی تشکیل شده، آزمون الایزا انجام گرفت تا کلونهای مولد آنتی بادی علیه آلکالین فسفاتاز شناسایی و انتخاب شوند. کلونهای تولید کننده آنتی بادی با کمک روش آخرین حد رقت (Limiting Dilution) (دو مرتبه) به صورت زیر کلون خالص در آمده و توسعه یافتند. چون پس از تشکیل کمپلکس APAAP، فعالیت آنزیمی باید حفظ شود تا بتوان از این کمپلکس در تکنیکهای ایمونوهیستوشیمی بهره برد، لذا اتصال آنتی بادی نباید باعث توقف فعالیت آنزیمی گردد. به منظور بررسی این موضوع، آزمایش الایزایی طراحی شده و مایع رویی کشت کلونهای هیبریدومایی انتخاب شده، توسط روش الایزای مذکور، بررسی شد. در مرحله بعد جهت تولید آنتی بادی با غلظت زیاد، هیبریدوماها به صفاق موش تزریق شدند و پس از تشکیل تومور، مایع صفاقی جمع آوری گردید. نهایتا آنتی بادیهای تولیدی توسط هیبریدوماهای به دست آمده تعیین ایزوتیپ شدند. یافته ها: در 6 بار فیوژن، 104 کلون هیبریدومائی بدست آمد که از این تعداد، 2 کلون A1G8 و A1G9 که مولد آنتی بادی اختصاصی و واجد جذب بالا در آزمایش الایزا بودند، انتخاب شد. پس از اجرای روش آخرین حد رقت نهایتا دو زیر کلون A1G8F7 که بصورت تک کلون درآمده بودند انتخاب گشتند. آزمایشات الایزا نشان داد که آنتی بادیهای تولیدی توسط هیبریدوماهای بدست آمده پس از اتصال به آنزیم، تاثیری بر فعالیت آن نگذاشته و به عبارت دیگر به ناحیه فعال آنزیم متصل نمی شوند. نتایج الکتروفورز مایع صفاقی موشهایی، که در آنها به وسیله هیبریدوماهای تولیدی، القاء تومور شده بود، باند پروتئینی مشخصی در ناحیه Y را نشان داد. آزمایشات مربوط به تعیین کلاس و زیر کلاس آنتی بادیهای تولید شده توسط کلونهای هیبریدومایی نشان دادک که هر دو آنتی بادی مذکور از کلاسIgG ، زیر کلاس IgG1  و دارای زنجیره سبک K هستند. نتیجه گیری: چون آنتی بادیهای تولید شده توسط کلونهای هیبریدومایی بدست آمده. از کلاس IgG بوده و روی فعالیت آنزیمی نیز تاثیری ندارند. لذا برای تشکیل کمپلس APAAP مناسب به نظر می رسند. سایر مراحل این پژوهش تا تشکیل این کمپلکس و استفاده عملی از آن در تکنیکهای ایمونوهیستوشیمی در حال انجام است.

زمینه و هدف: آنزیم آلکلین فسفاتاز (EC: 3.1.3.1) آنزیمی است که در بافت ها و ارگان های موجودات یوکاریوت مثل پستانداران و بعضی از موجودات پروکاریوتیک مثل باکتری ها ساخته می شود. از نظر ساختمانی آنزیم، یک گلیکو پروتئین دی مری بوده و شامل 4 یون روی و 2 یون منیزیم در هر دی مر است. عمل این آنزیم هیدرولیز منو استرهای فسفات به یک ترکیب آلی الکلی و یک گروه فسفات معدنی در یک محیط قلیایی است. آلکالین فسفات یک آنزیم متصل به غشا است. هدف از این مطالعه، مقایسه آنزیم آلکالین فسفاتاز با آنزیم مول هیداتی فرم انسانی است.مواد و روش ها: در این روش، آنزیم آلکالین فسفاتاز توسط رسوب با بوتانل، استن، سولفات آمونیم، سفادکس G200، کروماتوگرافی با میل ترکیبی و پره پریتو الکتروفورز خاصل گردید.یافته ها: این مطالعه نشان داد که می توان این آنزیم را 611.8 بار خالص نمود. فعالیت مخصوص آنزیم به دست آمده مساوی 201.9 واحد آنزیمی بر میلی گرم پروتئین بود. مقدار کربوهیدارت این آنزیم 5.2 درصد بوده و مشاهده گردید که دمای مناسب برای آنزیم 40 درجه سانتی گراد و pH مناسب آن مساوی 10.4 می باشد.نتیجه گیری: آنزیم مول هیداتی فرم انسانی خالص شده دارای دمای مناسب 40 درجه سانتی گراد و pH مناسب مساوی 10.4 می باشد که در مقایسه با آنزیم های آلکالین فسفاتاز جفت انسانی (دمای مناسب آن 45 درجه سانتی گراد و pH مناسب مساوی 10.5) متفاوت بوده و از این طریق می توان با مقایسه آن ها، به وجود آنزیم مول هیداتی فرم انسانی پی برد.

مقدمه: کریستال یکی از مواد مخدر زیان آوری است که متاسفانه در سال های اخیر وارد بازار ایران شده است. از آن جا که کریستال شکل خالص هروئین است لذا اثرات مخرب آن به مراتب بیش از این ماده می باشد. اعتیاد به کریستال علاوه بر زیان های جدی روانی، می تواند اثرات مخربی بر روی ارگان های مختلف داشته باشد. بررسی تغییرات آنزیم ها اغلب می توانند در شناسایی منبع آسیب ها کمک نمایند. آنزیم آلکالین فسفاتاز (ALP) در بسیاری از بافت ها یافت شده و فراوان ترین علت افزایش آن، ابتلا به بیماری های کبد و استخوان می باشد.هدف: از آن جا که مصرف کریستال موجب عوارض کبدی می شود بنا بر این اندازه گیری ALP می تواند برای ارزیابی اثرات زیان بخش این ماده مخدر مفید باشد.مواد و روش ها: مطالعه حاضر از نوع مطالعات موردی شاهدی بوده و به روش مقطعی بر روی 108 فرد معتاد به کریستال که برای اولین بار طی سال های 87-89 به مرکز ترک اعتیاد شهرستان صالح آباد تربت جام مراجعه کرده بودند و 50 فرد شاهد انجام شد. گروه شاهد از نظر سن و جنس با گروه مورد سازگاری داشت. سطح فعالیت آنزیم آلکالین فسفاتاز سرم با روش کالریمتری - اسپکتروفتومتری اندازه گیری شد. نتایج حاصل با آزمون تی و به کمک نرم افزار آماری SPSS نسخه 16 مورد ارزیابی قرار گرفت.نتایج: نتایج این تحقیق نشان داد که بین مصرف کریستال و سطح آنزیم آلکالین فسفاتاز سرم در دو گروه شاهد و مورد ارتباط معنی داری وجود دارد (0.001=P). هم چنین بین مدت زمان مصرف کریستال با سطح آلکالین فسفاتاز سرم و مصرف سیگار ارتباط معنی داری به دست آمد ((P<0.05.نتیجه گیری: نتایج ما نشان می دهد که سطح آلکالن فسفاتاز در مصرف کنندگان کریستال افزایش بارزی را نشان می دهد.

هیپرپاراتیروئیدیسم ثانویه و اثرات آن بر روی استخوان، یکی از مهم ترین مشکلات نارسائی مزمن کلیوی است. در مطالعه حاضر، رابطه سطح سرمی هورمون پاراتورمون را با سطح سرمی کلسیم، فسفر و آنزیم آلکالین فسفاتاز در مردان و زنان همودیالیزی، مورد مطالعه قرار گرفته است. این تحقیق توصیفی - تحلیلی به صورت مقطعی، بر روی 30 نفر از افراد همودیالیزی شهرستان زاهدان (16 مرد و 14 زن) با میانگین سنی 44 سال و مدت دیالیز 5 ماه تا 14سال (میانگین 30 ماه) صورت گرفت. آزمایش های کلسیم، فسفر و آلکالین فسفاتاز در طی سه ماه متوالی مورد بررسی قرار گرفت. همچنین اندازه گیری میزان سرمی هورمون پاراتورمون در سومین ماه مورد ارزیابی قرار گرفت. با استفاده از نرم افزار SPSS و آمار توصیفی و تحلیلی، داده ها تجزیه و تحلیل شده و ارتباط آنها مورد بررسی قرار گرفت. یافته های پژوهش نشان می دهد که زنان همودیالیزی بیشتر از مردان همودیالیزی، هورمون پاراتورمون و آنزیم آلکالین فسفاتاز ترشح می کنند در مورد یون های معدنی کلسیم و فسفر، مردان همودیالیزی بیشتر از زنان همودیالیزی در محدوده مقادیر غیرطبیعی هستند. در افراد همودیالیزی، ضریب همبستگی بین هورمون پاراتورمون و آنزیم آلکالین فسفاتاز وجود داشت اما بین هورمون پاراتورمون با کلسیم و فسفر ارتباط معنی داری وجود نداشت در مردان، همبستگی بین هورمون پاراتورمون با فسفر و آنزیم آلکالین فسفاتاز وجود نداشت اما در مورد کلسیم معنی دار بود. در زنان همبستگی معنی دار نبود. در زنان همبستگی بین هورمون پاراتورمون و آنزیم آلکالین فسفاتاز وجود داشت اما در مورد کلسیم و فسفر این همبستگی معنی دار نبود. نتیجه اینکه هیپرپاراتیروئیدیسم ثانویه و اثرات آن بر روی استخوان در زنان همودیالیزی بیشتر از مردان همودیالیزی می باشد.

لطفا برای مشاهده چکیده به متن کامل (PDF) مراجعه فرمایید.

به منظور تعیین اثر سطوح مختلف پرلیت بر فعالیت آنزیم آلکالین فسفاتاز در روده کوچک جوجه های گوشتی سویه راس (Ross 308) این آزمایش انجام گردید. این آزمایش به صورت فاکتوریل 4x2 در قالب طرح کاملا تصادفی با 180 قطعه جوجه گوشتی نر در سه تیمار (صفر، 2 و 4 درصد) و هر تیمار در 3 تکرار 20 قطعه ای انجام شد. تیمار شاهد با جیره فاقد پرلیت و تیمارهای آزمایشی با جیره غذایی حاوی 2 و 4 درصد پرلیت تغذیه شدند. در سنین 21، 28، 36 و 42 روزگی از هر تکرار 2 قطعه جوجه انتخاب و در آزمایشگاه از قسمت های مختلف روده کوچک آنها (1، 10، 30، 50، 70 و 90 درصد طول روده کوچک) نمونه گیری شد و فعالیت آنزیم آلکالین فسفاتاز اندازه گیری گردید. داده ها با استفاده از نرم افزار SAS مورد تجزیه وتحلیل آماری در سطح احتمال 5 درصد صورت گرفت. نتایج حاکی از این بود که مصرف پرلیت موجب افزایش معنی دار بر فعالیت آنزیم آلکالین فسفاتاز در هفته ها و قسمت های مختلف روده کوچک جوجه های گوشتی در تیمارهای آزمایش گردید ((P<0.05 نظر به این که آلکالین فسفاتاز روده در هضم و جذب اسیدهای چرب با زنجیره بلند و کلسترول در دیواره روده و بلوغ پرزهای روده می شود و از آن جایی که تاثیر پرلیت بر روده مورد تحقیق واقع نشده است مطالعه زیر طراحی و انجام گرفت.

زمینه: زهر مارها کمپلکس پیچیده ای از اجزای مختلف از جمله پروتئین ها و پپتیدها بوده که اکثر آنها دارای خواص آنزیمی می باشند. در این بررسی به مطالعه وجود آنزیم آلکالین فسفاتاز (ALP) در زهر و فراکسیون های افعی لبتینای ایران، روی سفادکس 100-G، به منظور بررسی مناسب بودن این روش برای جداسازی آنزیم مذکور پرداخته شد.مواد و روش ها: 100 میلی گرم از زهر خام افعی لبتینای ایران با استفاده از کروماتوگرافی ژل فیلتراسیون روی سفادکس 100-G که با استفاده از بافر استات آمونیوم 20 میلی مولار (4.6=pH) به تعادل رسیده بود، به 6 فراکسیون تقسیم شد. فعالیت آنزیم ALP با استفاده از روش سالکوفسکی و همکاران و با استفاده ازسوبسترای پارا نیترو فنیل فسفات اندازه گیری شد.نتایج: 91 میلی گرم (حدود 79%) از زهر خام افعی لبتینای ایران، پروتئین بود. زهر خام به 6 فراکسیون مجزا تقسیم شد که به ترتیب سرعت خارج شدن از ستون، (PI) Peak I تا Peak VI (PVI) نامگذاری شدند. فعالیت مخصوص آنزیم ALP در زهر خام و PI به ترتیب 4-10×4 و 3-10×1 واحد در میلی گرم به دست آمد. سایر پیک ها هیچ گونه فعالیتی از این آنزیم را از خود نشان ندادند.نتیجه گیری: نتایج حاصل از این بررسی نشان داد که زهر افعی لبتینای ایران دارای فعالیت آنزیم ALP بوده و PI نیز کل این فعالیت را به خود اختصاص داده است. سایر پیک های حاصل، فاقد هر گونه فعالیتی از آنزیم ALP بودند.

تولید و ترشح آلکالین فسفاتاز و اسید فسفاتاز به ترتیب توسط میکروارگانیسم ها و گیاهان نقش مهمی در تبدیل فسفات آلی به معدنی و دسترسی گیاهان به آن دارد. برای مطالعه این دو صفت در رویشگاه های فندق از خاک ریزوسفر پایه های فندق در دو رویشگاه طبیعی آق اولر (استان گیلان) و آرپاتپه (استان اردبیل) و رویشگاه دست کاشت ایستگاه تحقیقات البرز (استان البرز) در دو فصل بهار و تابستان نمونه برداری انجام شد. پس از عصاره گیری از خاک و انجام واکنش های بیوشیمیایی لازم، فعالیت آلکالین فسفاتاز و اسید فسفاتاز با استفاده از اسپکتروفتومتر سنجیده شد. بررسیهای ما نشان داد که میزان فسفر قابل جذب در سه رویشگاه متفاوت و به ترتیب در رویشگاه آرپاتپه 23.21 در رویشگاه البرز 32.42 و در رویشگاه آق اولر ppm56.8 بود. فعالیت آنزیم های آلکالین فسفاتاز 520.35(±21.38)µgpNPg-1h-1) و اسید فسفاتاز (678.02(±29.52)µgpNPg-1h-1) خاک در رویشگاه آرپاتپه در هر دو فصل بهار و تابستان از دو رویشگاه دیگر بیشتر بود. همچنین بررسیها نشان داد که میزان فعالیت اسید فسفاتاز در تابستان حدود 2.5 برابر فعالیت در بهار در هر 3 منطقه بوده که بیان کننده رشد ریشه ها در طول دوره رویش است. بنابراین فعالیت آلکالین فسفاتاز در فصل تابستان 2 برابر یا کمتر از آن در 3 رویشگاه می باشد که منعکس کننده دوره سکون در فعالیت میکروارگانیسم ها در طول تابستان است.